Молекулярно-генетическое исследование мутаций 15 экзона гена BRAF (биопсийный/операционный материал)

Лабораторное исследование для определения генетических мутаций 15 экзона гена BRAF. Наличие мутации провоцирует развитие меланомы, папиллярной карциномы, колоректального рака, рака яичников и ряда других опухолей различной локализации.

Зачем сдавать этот анализ?

• Определения показаний к назначению таргетной терапии.
• Меланома.
• Папиллярная карцинома.
• Немелкоклеточный рак легкого.
• Колоректальный рак.
• Рак яичников.

Подробное описание исследования

В последнее время уделяется большое внимание различным молекулярным маркерам, характеризующим биологические свойства опухоли. Молекулярно-генетические исследования выявляют тесную связь злокачественной̆ прогрессии опухолей̆ с накоплением соматических мутаций.

На формирование этих мутаций могут оказывать влияние, как эндогенные (свободные радикалы), так и экзогенные факторы (факторы внешней среды). Итогом такого влияния могут стать генетические нарушения в системе восстановления ДНК.

Ген BRAF расположен на длинном плече 7-й хромосомы в позиции 34 (7q34). Продукт гена — белок BRAF или серин-треонин-киназа- является важным звеном сигнального пути (RAS-BRAF-MAPK) и играет ключевую роль в процессах дифференциации клеток, их роста и клеточной гибели. Среди трех изоформ RAF-киназы (ARAF, BRAF, CRAF) BRAF имеет наибольшую активность и чувствительность. Чаще всего генетические изменения происходят в 15-м экзоне гена BRAF на участке V600E (T1799A), значительно реже встречаются мутации V600K, V600D и V600R.

Миссенс-мутация (точечная мутация) V600E приводит к замещению валина на глутамин в 600-м кодоне 15 экзона. При мутации V600K происходит замена валина на лизин, при V600D — на аспарагиновую кислоту, V600R — на аргинин. Мутации в 15 экзоне характеризуются как активирующие — усиливающие активность продукта гена. Мутации в гене BRAF активируют неконтролируемый рост (пролиферацию) опухолевых клеток, что приводит к увеличению опухоли в размерах и быстрому метастазированию.

Мутации в гене BRAF встречаютсяпри меланоме, немелкоклеточном раке легких, метастатическом колоректальном раке, трижды негативном раке молочной железы, папиллярном раке щитовидной железы и др.

Мутации гена BRAF характеризует более агрессивное течение заболевания и определяются в 8 % случаев опухолей.

Наиболее часто диагностируют при меланоме (60–70 %) и папиллярной карциноме (39— 83 %), при колоректальном раке (10–14 %), раке яичников, реже — в мелкоклеточном раке легкого.

Определить генетическую мутацию BRAF можно, используя молекулярно-генетические методы исследования. Материалом для исследования служит ДНК, полученная из биоптатов опухолевой ткани, а также из образцов тканей метастатического очага.

Базовый метод, позволяющий выявить мутации гена BRAF — полимеразная цепная реакция (ПЦР). Этот метод диагностики прост в использовании и обладает хорошей чувствительностью, но за один раз позволяет определить только одну мутацию, а их часто бывает несколько и все они имеют диагностическое значение.

Поэтому приходится выполнять еще один забор тканей, что не всегда представляется возможным. Метод, позволяющий в одном образце ткани выявить все мутации гена BRAF — секвенирование.

Ген BRAF — важный маркер для оценки природы опухоли. В основном определяется в предоперационной диагностике, а также при выборе препарата для дальнейшей химиотерапии.

Потому как, например, меланома (при которой часто определяется данная мутация) обладает высоким процентом устойчивости к традиционным схемам химиотерапии.

И терапия меланомы на современном этапе представляет собой комплекс мероприятий, направленных на блокаду основных сигнальных путей, специфичных для меланомы кожи, при помощи препаратов блокирующих продукты онкогенов.

В случае назначения подобных таргетных препаратов, определение статуса гена BRAF — обязательное исследование, потому как при отсутствии мутации затратное лечение окажется неэффективным, а в некоторых случаях может ускорить опухолевый процесс.

Источники

1. Клинические рекомендации, утв. Министерством здравоохранения Российской Федерации «Меланома кожи и слизистых оболочек», 2019 г.
2. Абрамова О.Э. Мутация гена BRAF V600 в опухолевых клетках — фактор неблагоприятного течения меланомы кожи? // Абрамова О.Э., Кудрявцев Д.В., Шинкаркина А.П., Гуменецкая Ю.В., Кудрявцева Г.Т., Конова М.В. — Саркомы костей, мягких тканей и опухоли кожи, 2019 г. № 2. С.12-17.
3. M.Dankner, A.N.Rose, S.Rajkumar, P.M.Siegel, I.R.Watson. Classifying BRAF alterations in cancer: new rational therapeutic strategies for actionable mutations. — Oncogene, 2018. Jun;37(24):3183-3199. Doi: 10.1038/s41388-018-0171-x.
4. NCBI : Gene ID: 673 «BRAF B-Raf proto-oncogene, serine/threonine kinase »
5. Dienstmann R. and Tabernero J. «BRAF as a Target for Cancer Therapy», Anti-Cancer Agents in Medicinal Chemistry, 2011, 11, 285-295 BRAF gene
6. Tiacci E., Trifonov V. et al. (June 2011). «*BRAF *mutations in hairy-cell leukemia». N. Engl. J. Med. 364(24): 2305–2315 BRAF gene: From human cancers to developmental syndromes

Подготовка к исследованию

Специальной подготовки не требуется.

Противопоказания и ограничения

Абсолютных противопоказаний нет.

Интерпретация результата

Интерпретацию результатов исследования проводит специалист-генетик в комплексе с результатами других исследований.

Референсные значения

Мутация не обнаружена